Цитогенетическое исследование костного мозга при лейкозе

Содержание

Миелолейкоз: Диагностика и анализы при заболевании миелолейкозом

Цитогенетическое исследование костного мозга при лейкозе

Миелоидный лейкоз — это раковое заболевание крови, поражающее стволовые клетки костного мозга. Оно долгое время протекает бессимптомно.

Миелолейкоз на ранних стадиях обнаруживается случайно — при анализах крови в связи с другими заболеваниями. Существует острый и хронический лейкоз.

Для того чтобы диагностировать миелобластный лейкоз необходимо пройти обследование. Какие анализы при миелолейкозе нужно сдавать, будет рассказано ниже.

На сегодняшний момент причины развития этой болезни до конца не выяснены. Известно, что такой диагноз ставится в 20% всех случаев раковых заболеваний крови. Подвержены миелолейкозу женщины и мужчины в возрасте 30-50 лет, реже дети.

Среди основных причин развития болезни называют хромосомные изменения в клетках — в одной хромосоме происходят мутации, в результате которых появляется ген, состоящий из разных частей хромосомы.

Этот ген нарушает кроветворную функцию в организме, что становится причиной онкологического заболевания.

К провоцирующим факторам развития миелобластного лейкоза относят следующие:

  1. Наследственность.
  2. Приём некоторых препаратов от опухолей.
  3. Воздействие радиации.
  4. Электромагнитные излучения.
  5. Вирусы.
  6. Воздействие химических веществ.

В группу риска по заболеваемости раком крови относят людей с уже обнаруженными онкологическими заболеваниями и подвергавшихся по этому поводу лучевой терапии, а также всех сотрудников предприятий, которые регулярно получают высокие дозы радиации.

Стадии миелолейкоза и симптомы

Рак крови в своём развитии проходит три стадии:

  1. Хроническая, при которой больной не испытывает никаких симптомов. Заболевание протекает в скрытой форме. Недомогание и слабость ощущаются заболевшим как симптомы переутомления. С развитием патологического состояния пациент начинает терять в весе, у него пропадает аппетит. В левой части живота, особенно после приёма пищи, появляется боль. Она свидетельствует об увеличении селезёнки. В редких случаях к указанным симптомам может добавляться нарушение зрения, одышка, появляются кровотечения.
  1. Акселерации, при которой обостряются и нарастают все симптомы хронической стадии. В этой фазе наблюдается упадок сил, обильное потоотделение, беспричинное повышение температуры до 38-39 градусов. Человек постоянно теряет вес, его мучают бесконечные боли в левом подреберье. Увеличенную в размерах селезёнку можно прощупать самостоятельно. На стадии акселерации происходит поражение сердечно-сосудистой системы, которое будет выражаться в частых сердечных приступах, аритмии.
  1. Терминальная (последняя) стадия миелолейкоза, при которой состояние пациента резко ухудшается. Он ощущает нетерпимые боли в костях, что является результатом поражения злокачественными клетками красного костного мозга. Продолжается потеря веса, держится высокая температура. На теле появляются синяки и кровоподтёки, т.к. снижается количество тромбоцитов. Из-за интенсивного увеличения в размерах селезёнки в животе появляется чувство тяжести, боли и распирания. В это время пациенты очень восприимчивы к различным инфекционным заболеваниям, которые могут стать причиной их смерти.

Диагностика и анализы при миелоидном лейкозе

При подозрении на миелоидный лейкоз пациенту предлагается пройти ряд исследований — УЗИ диагностику органов брюшной полости и лабораторные анализы крови:

  1. Общий анализ крови.
  2. Биопсия красного костного мозга.
  3. ПЦР крови.
  4. Цитогенетическое исследование крови.

УЗИ органов брюшной полости

На хронической стадии болезни происходит увеличение селезёнки в размерах. На этапе акселерации УЗИ селезёнки и печени показывает их увеличение более чем на 10 см, а во время бластного криза селезёнка достигает огромных размеров — она занимает почти всю брюшную полость. Её вес колеблется в пределах 5-8 кг.

Подготовка к ультразвуковому исследованию органов брюшной полости проводится натощак. Пить воду тоже нельзя как минимум за 4 часа до процедуры. За 2 дня до этого из меню исключаются все продукты, способные привести к газообразованию, а также алкогольные напитки. Пациентам, страдающим запорами, рекомендуют провести очистительную клизму. Перед УЗИ нельзя курить.

Результаты исследования пациент получает сразу после процедуры.

Общий анализ крови

Когда больной приходит к врачу с жалобами на общее недомогание, головные боли и усталость, врач отправляет его на общий анализ крови, который является очень результативным и показательным при многих заболеваниях. Несмотря на то что они имеет множество показателей, поставить диагноз всего лишь на этом исследовании невозможно.

Сдаётся анализ утром, натощак. Необходимо исключить за сутки употребление в пищу жирных продуктов, т.к. это может исказить результат. В качестве биологического материала используют капиллярную кровь из подушечки пальца. Обычно результат бывает готов через несколько часов.

На хроническом этапе распознать заболевание сможет только общий анализ крови, который показывает при наличии патологического процесса увеличение незрелых клеток крови, базофилов (больше 0,1%), эозинофилов (более 5%) и серьёзное увеличение лейкоцитов (более 9 тысяч) и понижение тромбоцитов без особых причин (у взрослого — менее 180, у детей с года — менее 160).

На стадии акселерации общий анализ крови показывает:

  • число миелобластов увеличивается до 20% — у здорового человека их быть в крови не должно;
  • количество базофилов увеличивается до 20%
  • до 100 тысяч единиц снижается уровень тромбоцитов;
  • продолжает расти число лейкоцитов.

На терминальной стадии общий анализ крови свидетельствует:

  • об увеличении числа миело и лимфобластов на 20 и более процентов;
  • о появлении в костном мозге больших скоплений бластов.

Это незрелые клетки крови, которые в дальнейшем преобразуются в кровяные тельца. При отсутствии патологии в крови они не встречаются. Поэтому при обнаружении бластов в крови проверяют и костный мозг на их наличие.

Исследование красного костного мозга при миелобластном лейкозе

Клетки крови вырабатываются красным костным мозгом. Для того чтобы подтвердить диагноз, проводят пункцию красного костного мозга и отправляют на исследование часть кости. Чаще всего биопсию берут из грудинных, тазовых (у взрослых), пяточных костей (у детей до 2-х лет).

Врач под местной анестезией специальным шприцем с иглой прокалывает кость — у взрослых на глубине 3-4 см, у детей — 1-2 см — и набирает в шприц ткань из полости кости. Затем полученный биоматериал наносят на стёкла и изучают под микроскопом в лаборатории.

Подготовка к процедуре будет заключаться в следующем: проводится беседа с врачом о наличии аллергической реакции на анестетик. Кроме того, пациенту, принимающему кроверазжижающие препараты, рекомендуют воздержаться от них в течение 2-х недель.

Накануне пункции больному нужно очистить кишечник и мочевой пузырь, принять душ, мужчине удалить растительность на груди в месте прокола. Больному даётся успокоительное, за 30 минут анестетик.

После этого доктор прокалывает мягкие ткани в районе кости, нащупывает её и вводит туда иглу со шприцем, осуществляя забор биоматериала. После этого место прокола обрабатывается антисептиком. Время процедуры — 20-30 минут.

Исследование образца занимает от 2 до 4 часов, в некоторых случаях — при отсутствии собственной лаборатории — на получение результата может уйти до месяца.

Пациент может через 30 минут отправиться домой. В течение 3 дней нельзя принимать душ и ванну, чтобы не мочить место прокола.

Пункция красного мозга не проводится в следующих случаях:

  • при остром инфаркте миокарда;
  • при остром нарушении мозгового кровообращения;
  • при гипертоническом кризе;
  • во время приступа стенокардии.

На хронический миелолейкоз в результатах анализа указывает количество лейкоцитов, выше 17 у взрослых и более 35% у детей после 5 лет. Если количество бластов (эритробласты, нормобласты) повышено на 20% — речь идёт об остром лейкозе.

ПЦР на наличие гена BCR — ABL1

Метод полимеразно-цепной реакции позволяет с высокой точностью определить не только наличие вирусов, но и хромосомные аномалии. ПЦР направлен на поиски гена BCR — ABL1, вызывающего рак крови. Это очень сложный химический процесс, требующий специальных лабораторных условий и высокой квалификации профессионалов.

Для анализа берут венозную кровь или красный костный мозг. Если требуется анализ крови, то у больного утром натощак берётся венозная кровь.

Для достоверности анализа рекомендуется не применять лекарственных препаратов за 2 недели до анализа. Результаты готовятся в течение суток.

Если обнаружен ген BCR — ABL1, даже в небольших количествах, значит диагноз хронического миелолейкоза подтверждается.

Цитогенетическое исследование на наличие Ph филадельфийской хромосомы

Наличие филадельфийской хромосомы подтверждает диагноз миелобластный лейкоз. Эта хромосома появляется в результате объединения двух участков на 22-ой хромосоме. Поиск Ph проводится методом ПЦР, о котором говорилось выше.

Данная хромосомная аномалия наблюдается в 95% случаев хронической стадии болезни, значит этот метод помогает определить заболевание на ранней стадии.

Профилактика и лечение миелолейкоза

Благодаря указанным методам диагностики становится возможным обнаружить болезнь на начальной стадии и приступить к её лечению. К сожалению, до сих пор не существует препаратов, способных вылечить от миелолейкоза, но на время можно продлить жизнь онкобольного. Продолжительность жизни пациента будет зависеть от того, в какой стадии развития патологии он находился при обращении к врачу.

Основная цель терапии — препятствовать бесконтрольному росту патологических клеток крови. Для это назначают следующее лечение:

  • медикаменты для остановки роста опухоли;
  • лучевая терапия;
  • пересадка костного мозга;
  • химиотерапия.

100% выздоровление возможно только в тех случаях, когда костный мозг донора полностью идентичен костному мозгу пациента.

Профилактических мер для предотвращения миелобластного лейкоза не существует. Важно ежегодно сдавать общий анализ крови и при появлении первых признаков заболевания обращаться за помощью к квалифицированным специалистам.

Источник: https://www.SdamAnaliz.ru/analizy-dlya-razlichnyh-sostoyanij/analizy-pri-mielolejkoze.html

Городская клиническая больница №31 – Пациентам в помощь. Гематологические заболевания. Введение. Часть I. Лимфомы (страница 33)

Цитогенетическое исследование костного мозга при лейкозе

Когда врач начинает лечить больного с подозрением на лимфому или другую болезнь крови, то ему необходимо понять, в каком состоянии находится очень важный орган пациента, в котором происходит кроветворение – костный мозг. Для этого делаются специальные анализы, о которых мы постараемся рассказать подробнее.

В медицинской терминологии словом «мозг» или «мозговое вещество» обозначает внутреннюю часть органа или ткани, которая отличается от его внешней части. Например, головной мозг лежит внутри черепа, спинной мозг находится в канале из позвонков. Кость тоже не является однородным плотным веществом.

На поверхности лежит более плотный, твердый слой, а внутри кость представляет собой губку с более мелкими или крупными ячейками. Строение зависит от того, какую работу она выполняет в организме.

Внутри кости, а именно в этих ячейках и находится костный мозг, где он хорошо защищен природой от опасностей внешнего мира. Костный мозг выглядит как обычная кровь, но под микроскопом видно, что он состоит из материнских (стволовых) и созревающих клеток, а также клеток микроокружения.

У здорового взрослого человека объем костного мозга равен примерно 3-4 литрам. В толстых костях мозга больше, в тонких – меньше.

Внутри костей для клеток природой созданы поистине «тепличные» условия, поэтому и вредные (патологические) клетки также стремятся занять «теплое местечко», вот почему исследование костного мозга часто является самым важным для постановки диагноза, а значит, и для правильного лечения.

При взятии костного мозга для анализа, как и при взятии любого другого материала из организма используются принципы максимальной пользы, безопасности и безболезненности. Делают это уже десятки лет, поэтому методики надежно отработаны. Чаще всего используют аспирационную биопсию и трепанобиопсию костного мозга.

Аспирационная биопсия костного мозга

Данная процедура нужна для того, чтобы получить на анализ капельку костного мозга.

Эта капелька позволяет быстро и точно понять, что происходит с кроветворением, почему что-то пошло не так, есть ли в костном мозге «вредные» клетки и какие они.

Сразу же скажем, что при этом и при других анализах, количество костного мозга очень быстро восстанавливается и организм не терпит никакого урона.

Аспирационную биопсию выполняют так. Врач вместе с пациентом решают, из грудины или со спины брать костный мозг. Если выбирают первый вариант, то протирают спиртом кожу над верхней третью грудины, обезболивают новокаином мягкие ткани и  специальной иглой и шприцем берут  0,5 миллилитра костного мозга.

Если выбирают второй вариант, то на границе ягодичной и поясничной области, отступив от позвоночника в сторону на 10 см, обрабатывают кожу спиртом и обезболивают мягкие ткани. Затем также специальной иглой берут полмиллилитра костного мозга на анализ. Вся процедура от момента протирания кожи спиртом до окончания в опытных руках занимает времени меньше минуты.

Как до, так и после нее можно сразу есть, пить, мыться, словом, заниматься повседневными делами.

Получение капельки костного мозга позволяет провести:

  • исследование клеточного состава;
  • исследование генов и хромосом опухолевых и стволовых клеток;
  • проточную цитометрию клеток;
  • молекулярно-генетические исследования.

Трепанобиопсия костного мозга

На врачебном языке словом «биопсия» называют взятие жидкой части или кусочка любого органа для исследования, а «трепанобиопсией костного мозга» называется взятие тонкого столбика кости с мозгом внутри для комплексного анализа кроветворных клеток,  их взаимодействия с окружающими клетками, изменений структуры кости. Трепанобиопсия костного мозга позволяет обнаружить опухолевые клетки, а также увидеть характерные черты различных заболеваний. Это исследование применяют для того, чтобы уточнить степень заболевания, а иногда только этот анализ позволяет правильно поставить диагноз.

В обычной врачебной работе трепанобиопсию костного мозга делают очень редко, и мало кто знает, что это такое. Именно поэтому кратко опишем, как она делается.

Сразу скажем, что во время забора анализа любое прикосновение к любым нервам, позвонкам, спинному мозгу полностью отсутствует. Процедура достаточно простая и может проходить амбулаторно, но делает ее обязательно врач.

Пациент может сидеть или лежать в зависимости от своего желания и навыков доктора.

Укажем точки на теле, откуда берут материал. На границе ягодичной и поясничной области, отступив 10 см от позвоночника в сторону, врач находит места, где очень близко к поверхности кожи подходят самые массивные кости человека – подвздошные кости таза.

Врач протирает спиртом кожу, тонкой иглой обезболивает мягкие ткани и специальной иглой берет материал. Вся процедура от момента протирания кожи спиртом до получения маленького столбика костной ткани (длиной один-два см) в опытных руках занимает три-четыре минуты.

Как до, так и после нее можно сразу есть, пить, мыться, одним словом, заниматься повседневными делами. На месте взятой кости быстро вырастает новая костная ткань. Полученный материал отправляют на гистологическое исследование.

При необходимости выполняют углубленное иммуногистохимическое исследование.

Лабораторий, в которых могут квалифицированно проанализировать полученный материал, в городе мало. Кроме того, сама методика анализа очень трудоемкая, поэтому подготовка ответа занимает не менее двух недель.

Исследование клеточного состава (миелограмма)

Капелька костного мозга аккуратно распределяется по стеклышку, окрашивается специальными красками и отправляется в лабораторию. Как правило, микроскопический анализ и написание заключения занимает 1-2 дня. Этот метод относится к одному из самых технически простых, однако специалистов-цитологов, способных правильно оценить то, что видно под микроскопом, в городе очень мало.

Цитогенетическое исследование

Цитогенетическое исследование  выявляет болезнь на уровне хромосом.

В школе на уроках биологии мы изучали, что вся информация о человеке зашифрована природой в его генах. Эти гены собраны в особые цепочки, которые спрятаны в ядре клетки. Цепочки генов называются «хромосомами». Цитогенетический анализ хромосом можно провести в момент деления клетки.

Анализ возможен только у активно делящихся клеток – стволовых и опухолевых. При некоторых болезнях возникают типичные поломки хромосом, которые можно увидеть в микроскоп, и обнаружение их имеет ключевое значение для диагноза, лечения и предсказания результатов лечения. Для анализа берут около двух миллилитров костного мозга.

Цитогенетическое исследование – это очень сложное, трудоемкое дело, которое требует дорогого оборудования, дорогих специальных химических и биологических веществ (реактивов), труда высококвалифицированных лаборантов и врача-цитогенетика.

Выполнение такого исследования возможно только в некоторых специализированных больницах и научных центрах. Анализ и написание заключения занимает около 3-4 дней.

Молекулярно-генетические методы исследования (ПЦР и FISH)

Как уже говорилось, в организме человека, как и во всяком живом существе, вся информация зашифрована в генах.

У всех людей есть похожие гены (например, те, которые указывают, что у нас одна голова и четыре конечности) и есть непохожие, уникальные (например, те, которые указывают на цвет глаз, оттенок кожи, голос).

Для некоторых болезней найдены типичные изменения (мутации) генов, которые вызывают, «запускают» болезнь, и типичные сопровождающие болезнь изменения генов. Чтобы их найти и назначить нужное лечение требуется один-два миллилитра костного мозга больного человека. В некоторых случаях достаточно и крови.

Ученые создали специальные реактивы – белки-ферменты, которые сами находят в исследуемой жидкости нужный ген и делают множество его копий, которые легко обнаружить. Этот метод называется полимеразная цепная реакция (ПЦР).

С помощью ПЦР можно обнаружить любой ген – и опухолевый и инфекционный, даже если в организме больного организма опухолевые клетки присутствует в ничтожно малых количествах.

Метод очень точен, прост в использовании, но тоже требует чрезвычайно дорогостоящего оснащения (оборудования, реактивов) и труда специалистов. Ответ выдается через 1-2 дня после постановки анализа.

Некоторые гены очень тяжело выявить полимеразной цепной реакцией, тогда на помощь приходит FISH-метод. При FISH-методе используют уже сделанные на заводе светящиеся крупные молекулы настроенные на те гены, которые необходимо обнаружить.

Эти молекулы смешивают с кровью пациента, а потом врач лабораторной диагностики по характеру свечения определяет результат. Метод очень точен, однако имеет свои сложности в применении и требует чрезвычайно дорогостоящего оснащения (оборудования, реактивов) и труда высококлассных специалистов.

Ответ выдается через 1-2 дня после постановки анализа.

Проточная цитометрия

Чтобы лучше понять этот метод, сравним клетку с плодом киви. Поверхность клетки очень похожа на волосистую кожицу этого фрукта. Волоски клетки – это молекулы-рецепторы, которыми клетки «переговариваются» между собой.

По набору этих молекул-волосков можно из многих клеток точно выделять похожие, подобно тому, как по форме одежды можно определить род занятий человека. Опухоль – это множество абсолютно одинаковых клеток, с одним и тем же набором волосков-рецепторов, похожих друг на друга, как солдаты вражеской армии своими мундирами.

Используя специальные краски, можно выделить группу одинаковых клеток и с точностью сказать, какая это опухоль, а значит, правильно выбрать лечение и предвидеть его результат.

Как же делается проточная цитометрия? Представим, что можно аккуратно кисточкой покрасить каждый волосок плода киви в свой цвет. Задача фантастически  сложная.

Тем не менее, с этой задачей справляются врачи-цитометристы, аппараты которых могут в автоматическом режиме за несколько минут  покрасить и оценить десятки поверхностных молекул на сотнях тысяч клеток, найти и обозначить больные клетки.

При этом метод позволяет исследовать любые клетки в любой жидкости: кровь, костный мозг, плевральную жидкость и т.д. Проточная цитометрия незаменима в диагностике лейкозов и многих других болезней крови, когда необходимо быстро и точно поставить диагноз.

Проточная цитометрия –это очень сложное дело, которое требует дорогого оснащения, труда очень квалифицированного специалиста. Выполняют этот анализ только в некоторых больницах.

Несомненный плюс данной методики в том, что можно исследовать любой жидкий материал, что она быстрая и высочайше точная.

Анализ и написание заключения занимает 1-2 дня, но сложные случаи могут потребовать больше времени.

Гистологическое исследование

При гистологическом исследовании врач-патологоанатом изучает материал на клеточном уровне. Для этого взятый при биопсии кусочек органа или ткани специальным образом обрабатывают, делают тончайшие срезы и смотрят под микроскопом.

При многих заболеваниях имеются типичные изменения в тех или иных органах, поэтому иногда достаточно только гистологического анализа, чтобы точно поставить диагноз.

Если же врач  обнаруживает изменения, похожие на опухолевые, то для более  точного диагноза необходимо  дополнительное проведение  иммуногистохимического исследования.

С помощью гистологического исследования костного мозга можно ответить на многие вопросы. Например, при необъяснимом уменьшении количества каких-то клеток крови (тромбоцитов, лейкоцитов, эритроцитов) это единственный метод, который позволяет с вероятностью 100% исключить поражение костного мозга лимфомой или другим опухолевым процессом.

Этот метод позволяет выяснить, правильно ли происходит кроветворение или есть в нем какие-либо нарушения. Гистологическое исследование незаменимо для выявления поражения костного мозга, например, метастазами, болезнями крови, инфекцией.

В связи с длительной лабораторной обработкой материала для анализа время до выдачи результата составляет не менее двух недель.

Иммуногистохимическое исследование

Суть данного метода в целом близка методу проточной цитометрии. С помощью специальных красок и приборов окрашиваются молекулы на поверхности клеток, и врач-патологоанатом изучает результат.

Различия состоят в том, что в данной ситуации исследуют не жидкую часть, а твердые кусочки тканей и органов, взятые при биопсии. Этот метод тоже высокотехнологичен, дорогостоящ и требует работы специалиста высокого класса.

Немногие лечебные центры способны качественно выполнять данное исследование.

Источник: https://www.spbsverdlovka.ru/patsientam/biblioteka-patsienta/patienth/page-33.html

Лейкоз. Как расшифровать, принципы диагностики лейкоза

Цитогенетическое исследование костного мозга при лейкозе

Для злокачественного поражения системы кроветворения характерны такие изменения в лабораторном анализе:

  1. СОЭ. При злокачественном поражении кроветворной системы, показатели СОЭ увеличиваются. Для того чтобы убедится в достоверности результатов, необходимо сравнить текущие показатели СОЭ с предыдущими результатами исследования.
  2. Лейкоциты. При лейкозах уровень белых кровяных телец может быть ниже или выше физиологической нормы. Данный показатель зависит от формы злокачественного процесса. При остром течении злокачественного процесса, уровень лейкоцитов повышается, а при хронической форме заболевания этот показатель может быть ниже физиологической нормы.
  3. Эритроциты. Если в результатах лабораторного исследования крови наблюдается снижение показателей эритроцитов до 1-2*109/л, то наличие онкологии в организме подтверждается.
  4. Тромбоциты. На начальной стадии развития злокачественного процесса, уровень тромбоцитов в периферической крови может оставаться неизменным. По мере прогрессирования лейкоза, показатели тромбоцитов уменьшаются в 10-15 раз.
  5. Гемоглобин. Уменьшение показателей гемоглобина наблюдается у пациентов с лейкозом на поздней стадии развития. В результатах лабораторного исследования крови показатели гемоглобина составляют от 50 до 60 г/л. Перед тем как подтвердить наличие онкологии, проводится дифференциальная диагностика с железодефицитной и В12 дефицитной анемией.
  6. Ретикулоциты. На ранней стадии развития злокачественного процесса может наблюдаться снижение показателей ретикулоцитов, так как эти клетки являются предшественниками эритроцитов.
  7. Эозинофилы и базофилы. Для лейкоза характерно полное отсутствие базофилов и эозинофилов в периферической крови.

Параметры анализа крови из пальца при разных вариантах рака

При острой форме данного заболевания наблюдаются серьезные изменения в кроветворной системе. Одним из характерных признаков острого лейкоза является снижение показателей гемоглобина до 30- 60 г/л.

Также, происходит уменьшение количества эритроцитов, что в комплексе приводит к развитию тяжелой анемии. У многих пациентов с острым течением лейкоза происходит снижение концентрации тромбоцитов до 20*109/л.

 

Важным признаком острой формы онкологии системы кроветворения является так называемый лейкемический провал, при котором в периферическом кровотоке присутствуют только бластные формы клеточных элементов, а их переходные формы полностью отсутствуют. Уменьшение количества лейкоцитов (лейкопения) характерно для миелолейкозов. С учётом разновидности онкологии системы кроветворения, могут быть получены такие результаты исследования капиллярной крови:

  1. Миеломонобластный. В результатах исследования наблюдается повышение или понижение уровня тромбоцитов, лейкопения, умеренная или нормохромная анемия.
  2. Монобластный. В периферической крови уменьшается количество тромбоцитов, снижаются показатели гемоглобина, падает уровень эритроцитов.
  3. Мегакариобластный. В результатах анализа отсутствует изменения показателей тромбоцитов.
  4. Лимфобластный. В периферическом кровотоке преобладают бластные клеточные элементы большого размера.
  5. Промиелоцитарный. При данной форме рака наблюдается скопление в системном кровотоке промиелоцитов, уменьшение количества лейкоцитов, гемоглобина, тромбоцитов и эритроцитов.
  6. Эритромиелоз. В результатах может обозначаться лейкопения, меняется размер и форма эритроцитов.

Биохимический анализ: его параметры при раке

При злокачественном поражении системы кроветворения, результаты биохимического исследования крови будут иметь такой вид:

  1. Снижение показателей фибриногена, глюкозы и альбумина.
  2. Увеличение показателей гамма-глобулинов, ЛДГ, билирубина и мочевины. 

Биохимический анализ: тест на онкомаркеры

При развитии онкологии системы кроветворения может повышаться уровень бета-2-микроглобулина, имеющего белковую природу. Также, на развитие онкогематологического заболевания указывает изменение метаболизма ферритина. 

Что влияет на точность диагностики

На достоверность результатов лабораторного исследования оказывают влияние как внешние, так и внутренние факторы. К таким факторам относят:

  1. Табакокурение.
  2. Употребление продуктов питания, влияющих на соотношение форменных элементов крови.
  3. Наличие инфекционно-воспалительного процесса в организме или ранее перенесенные инфекционные заболевания.
  4. Физические и эмоциональные перегрузки.
  5. Менструации.

Анализ крови в норме

При отсутствии патологических изменений в организме, рузельтаты общего анализа крови имеют такой вид:

  1. Гемоглобин — для женщин показатель составляет от 120 до 150 г/л, для мужчин равен от 130 до 170 г/л.  
  2. Эритроциты — для женщин диапазон нормы составляет от 3,5 до 4,7·1012/л, для мужчин норма составляет от 4,0 до 5,0·1012/л.
  3. Тромбоциты — диапазон нормы составляет от 180 до 320 ·109/л.
  4. Лейкоциты — показатели не выходят за пределы 4,0-9,0×109/л
  5. СОЭ — для женщин показатели нормы составляют от 5 до 15 мм/ч, а для мужчин от 3 до 10 мм/ч.

Нарушения состава крови при лейкозе

Характерным признаком развития лейкоза является уменьшение количества тромбоцитов. Кроме того, при острой форме заболевания, количество незрелых клеточных элементов может возрастать до 95-99%. При хронической форме заболевания, уровень бластных элементов не превышает 10%.

Острые лейкозы: принципы диагностики и лечения

Острый лейкоз — это тяжелое злокачественное поражение системы кроветворения, в основе которого лежит образование и стремительное деление незрелых клеточных элементов, которые за короткий промежуток времени вытесняют гемопоэтические ростки.

В общих принципах диагностики острых лейкозов лежит несколько информативных методов, среди которых выделяют:

  1. Гематологические анализы, включающие стернальную пункцию и лабораторное исследование крови. При исследовании периферической крови, на развитие злокачественного процесса указывает наличие бластных элементов, уменьшение количества тромбоцитов, анемия, лейкоцитоз и повышение СОЭ. При лабораторном исследовании фрагментов костного мозга, ведется оценка соотношения клеточных элементов (миелограмма). Важным критерием является соотношение клеток эритроцитарного и лейкоцитарного ряда. При развитии лейкоза данное соотношение меняется в пользу клеток лейкоцитарного ряда.
  2. Цитогенетическое исследование. В ходе диагностики определяются хромосомные мутации и аномалии генома. У 90% пациентов с острой формой данного заболевания определяется одно из нарушений на хромосомном и генном уровне.
  3. Иммунологический анализ с использованием моноклональных антител. Суть методики заключается в обработке форменных элементов крови моноклональными антителами с флюоресцентной меткой и внедряют в кровеносный сосуд, просвечиваемый лазером. В ходе исследования оценивается количество антигенов, экспрессируемых мечеными клетками.

Общие принципы лечения острых лейкозов

Терапия острой формы лейкоза проводиться в условиях онкогематологического отделения. Таким пациентам назначаются курсы химиотерапии, иммунотерапии и сеансы воздействия ионизирующим излучением. Весь процесс лечения состоит из таких последовательных этапов:

  1. Этап индукции, направленный на достижение состояния ремиссии заболевания.
  2. Этап консолидации, цель которого заключается в закреплении достигнутого результата.
  3. Этап поддержания состояния ремиссии.

Указанные этапы реализуются в соответствии со схемами полихимиотерапии, которые подбираются индивидуально для каждого пациента с учетом морфологических особенностей заболевания.

Для достижения ремиссии лейкоза может потребоваться от 4 до 6 недель усиленного лечения. Далее, для закрепления полученного результата проводиться не менее 2-3 курсов химиотерапевтического воздействия.

Для поддержания результата, в течение 3-х лет пациент получает противорецидивную терапию.

Для профилактики развития ДВС-синдрома, агранулоцитоза, нейролейкемии и инфекционных осложнений, пациентам назначается курс антибиотикотерапии, переливание свежезамороженной плазмы крови, тромбоцитарной и эритроцитарной массы.

Радикальным методом лечения и профилактики рецидива острой формы заболевания, проводиться трансплантация вещества костного мозга. Перед выполнением пересадки, пациент проходит курс лучевой и химиотерапии, что позволяет уничтожить остатки патологически измененных клеток.

Также, выполняются мероприятия по подавлению иммунитета и профилактике отторжения трансплантата.

Пациенты с острым лейкозом нуждаются в комплексном и постоянном уходе, включающем такие мероприятия:

  1. Гигиеническая обработка ротовой полости.
  2. Профилактика пролежней.
  3. Туалет наружных половых органов после каждого мочеиспускания и акта дефекации.

Питание таких пациентов должно быть сбалансированным и витаминизированным.

Говорить о полном выздоровлении можно в том случае, если в течение 5 лет после окончания комплексного лечения, пациент не столкнулся с рецидивом заболевания.

В процессе комплексного лечения, губительному воздействию ионизирующего излучения и химиопрепаратов подвергаются не только патологические клетки, но и здоровые клеточные элементы. Первыми под удар попадают клетки с ускоренным делением.

Химиопрепараты и лучевая терапия повреждают клетки кишечного эпителия, слизистой оболочки ротовой полости и волосяные фолликулы.

Кроме того, сеансы химиотерапии приводят к возникновению тошноты и рвоты, временной алопеции и угнетение аппетита. Для борьбы с тошной и рвотой, в комбинации с химиотерапией назначаются противорвотные медикаменты.

Лечение осложнений

Снижение количества эритроцитов и тромбоцитов в периферической крови, приводит к развитию таких осложнений острого лейкоза, как кровотечения и тяжелая анемия. Кроме того, организм таких пациентов становится восприимчивым к развитию инфекционных заболеваний. Для лечения инфекционных осложнений используется эмпирическая антибиотикотерапия, включающая приём цефалоспоринов 3 и 4 поколения.

Для борьбы с кровотечениями проводится переливание тромоцитарной массы. Лечение тяжелой анемии заключается в переливании эритроцитарной массы. Ещё одним распространенным осложнением является синдром распада (лизиса) опухоли.

Лечение включает приём антиаритмических препаратов, постановку очистительных клизм (при хроническом запоре), коррекцию водно-солевого баланса при помощи капельного введения физиологических растворов. При необходимости могут назначаться противовоспалительные и анальгезирующие средства.

При тяжелом течении синдрома распада опухоли, выполняется гемодиализ.

Прогноз

Современные химиотерапевтические препараты позволяют достичь стойкой ремиссии у 65-80% пациентов с подобным диагнозом. Из этого количества не менее 20% пациентов достигают полного выздоровления. Прогнозы относительно выживаемости и выздоровления наиболее благоприятны при остром течении лимфобластных лейкозов. Менее благоприятный прогноз касается миелобластных лейкозов.

Остались вопросы? Вы можете позвонить нам или оставить заявку на нашей сайте и опытные врачи-координаторы ответят на все ваши вопросы по поводу лучших специалистов, клиник и цен на лечение!

Источник: https://clinics.direct/ru/articles/treatment-of-leukemia/

Мезенхимальные стромальные клетки, полученные из острого миелоидного лейкоза костного мозга, демонстрируют аберрантную цитогенетику и выработку цитокинов | журнал рака крови – Статьи – 2020

Цитогенетическое исследование костного мозга при лейкозе

  • Острый миелоидный лейкоз
  • онкогенез

Мезенхимальные стромальные клетки, полученные из костного мозга (BM-MSC), играют фундаментальную роль в микроокружении BM (BME), и аномалии этих клеток могут способствовать патогенезу острого миелоидного лейкоза (AML).

Целью исследования было охарактеризовать профиль экспрессии цитокинов и генов, иммунофенотип и цитогенетику BM-MSC от пациентов с AML по сравнению с нормальными BM-MSC от здоровых доноров. AML BM-MSC показали пониженные уровни белка-1 хемоаттрактанта моноцитов по сравнению с нормальными BM-MSC.

BML-MSC AML экспрессировали сходный β1 интегрин, CD44, CD73, CD90 и E-кадгерин по сравнению с нормальными BM-MSC. Цитогенетический анализ выявил хромосомные аберрации в AML BM-MSCs, некоторые из которых перекрываются, а другие отличаются от их соответствующих бластов AML.

Не было обнаружено существенных различий в экспрессии генов между BML-MSC AML по сравнению с нормальными BM-MSC; однако сравнение различий между ОМЛ и МСК у пациентов с ОМЛ с различиями между нормальными гематопоэтическими клетками и нормальными МСК с помощью анализа пути Изобретательности показало ключевые различия установки ОМЛ: (1) регуляция гена выше по течению путем трансформации фактора роста бета 1, фактора некроза опухоли тканевая трансглутаминаза 2, CCAAT / энхансер-связывающий белок альфа и SWItch / сахароза, не связанные с ферментами, связанные с матрицей, актин-зависимый регулятор хроматина, подсемейство a, член 4; (2) передача сигналов интегрина и интерлейкина-8 в виде чрезмерно представленных канонических путей; и (3) активация транскрипционных факторов J мышиного гомеолога вирусного онкогена остеосаркомы и гомолога вирусного онкогена птичьего миелобластоза v-myb. Таким образом, фенотипические аномалии AML BM-MSCs указывают на дисфункциональную BME, которая может влиять на выживаемость и пролиферацию AML.

Острый миелоидный лейкоз (ОМЛ) представляет собой гетерогенное заболевание, возникающее в микроокружении костного мозга (ММЕ) под влиянием мезенхимальных стромальных клеток (МСК), эндотелиальных клеток, остеоцитов, перицитов, адипоцитов, моноцитов, фибробластов и их секретируемых внеклеточных гликозаминогликанов, и цитокины.

BME играет фундаментальную роль в росте, пролиферации и выживании клеток AML. Рост лейкозных клеток в BME также нарушает нормальный гемопоэз.

1 Взаимное взаимодействие между клетками BME и AML через сигнальные молекулы паракрина и аутокрина вместе с клеточной и межклеточной адгезией способствует покою клеток лейкемии, активации про-выживания и антиапоптотических путей, устойчивости к химиотерапии и минимальной остаточной болезни.

2, 3, 4 Кроме того, нарушение адгезионно-опосредованных взаимодействий со злокачественными клетками может преодолеть обусловленную окружающей средой устойчивость к химиотерапии. 5, 6, 7 Накопленные данные показали, что микросреда рака непосредственно способствует патогенезу, устойчивости к лечению или рецидиву различных злокачественных новообразований.

Например, факторы роста из стромальных клеточных линий придают устойчивость к целенаправленной терапии и химиотерапии в клеточных линиях меланомы, глиобластомы и колоректального рака в системе совместного культивирования.

8 Повреждение доброкачественных стромальных клеток, вызванное химиотерапией, привело к снижению химиотерапевтического эффекта и способствовало выживанию и прогрессированию клеток рака простаты. 9 При раке молочной железы экспрессия генов опухолевых клеток изменялась при совместном культивировании в различных тканевых микроокружениях.

10 В исследовании хирургически резецированной гепатоцеллюлярной карциномы профиль экспрессии гена незлокачественной периопухолевой ткани в образце резекции мог предсказать рецидив заболевания, тогда как профиль экспрессии злокачественных клеток сам по себе этого не сделал.

11 Эти данные свидетельствуют о том, что изменения в окружающей стромальной ткани независимо способствовали поведению заболевания.

Работа на мышиных моделях предоставила доказательства того, что изменения в BME могут способствовать развитию гематологической злокачественности: например, нокаут эндонуклеазы RNase III Dicer1, специфически в клетках мезенхимального остеопрогенитора, приводил к миелодисплазии и появлению ОМЛ, несмотря на сохранение генетической целостности в гематопоэтической. родословная. 12 Другое исследование показало, что активирующая мутация β-катенина в остеобластах индуцирует ОМЛ через передачу сигналов Notch. 13 Принимая во внимание эти сообщения об аберрациях стромы и микроокружения, особенно влияющих на развитие злокачественных состояний, мы предположили, что полученные из BM MSC (BM-MSC) от пациентов с AML будут демонстрировать явные генотипические и фенотипические различия по сравнению с BM-MSC от нормальных здоровых доноров.

Центральным компонентом BME являются MSC, которые способны вызывать различные клеточные линии, такие как остеобласты, адипоциты и хондробласты. 14 Цитогенетические нарушения были зарегистрированы в BM-MSCs от пациентов с миелодиспластическим синдромом (MDS) и AML, которые отличались от лейкозных бластов и могут быть связаны с худшими исходами.

15 Отличительный профиль экспрессии генов MSCs в педиатрических случаях MDS и AML был обнаружен по сравнению со здоровыми донорами.

16 Чтобы получить более полное представление о характеристиках МСК при ОМЛ, мы стремились охарактеризовать профиль экспрессии цитокинов и генов, иммунофенотип и цитогенетику первичных ВМ-МСК, выделенных у пациентов с ОМЛ, по сравнению со здоровыми донорами.

Предметы и методы

Исследование было проведено с письменного информированного согласия в соответствии с Хельсинкской декларацией и в соответствии с руководящими принципами Институционального контрольного совета Консорциума по раковым заболеваниям Университета Вашингтона / Фреда Хатчинсона (FHCRC), который одобрил исследование.

Первичная культура BM-MSC

Культуры MSC были успешно получены из аспиратов BM из 22 пациентов с AML и 5 здоровых доноров, как из свежих, так и из криоконсервированных образцов. Мононуклеарные клетки (MNC) выделяли из образцов BM с использованием среды для разделения лимфоцитов (Media Tech Inc., Manassas, VA, USA).

Приблизительно от 2 до 5 миллионов свежих или криоконсервированных клеток ВМ культивировали в течение ночи в модифицированной Исковой среде Дульбекко (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США), 15% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, 15% лошадиной сыворотки, 1% пенициллина– стрептомицин (носители и добавки от Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США), затем носители заменяли (удаляя неадгезивные клетки) поверх прикрепленных клеток негематопоэтическими экспансионными средами (NHEM, Miltenyi, Auburn, CA, USA) в 5% кислорода в гипоксической камере для более точного приближения к синусоидальным областям БМ. Клетки также культивировали в нормальных 21% условиях кислорода для сравнения продукции цитокинов при различных концентрациях кислорода. Через 48 часов неприлипающие клетки удаляли из культуры путем промывания фосфатно-буферным раствором. В течение 1-2 недель адгезивные веретенообразные клетки получали и субкультивировали еженедельно путем трипсинизации в течение ~ 10-15 пассажей. МСК собирали для анализа после третьего-четвертого пассажей. Подобные культуры были получены из нормальных BM от здоровых доноров, и для сравнения также использовались линии стромальных клеточных линий homo sapiens (HS) -5 и HS-27a (любезно предоставленные Dr Beverly Torok-Storb, FHCRC).

Проточную цитометрию проводили на суспензиях отдельных стромальных клеток, которые окрашивали следующими моноклональными антителами против человека: аллофикоцианиновым антителом против CD90, CD34 или CD45, флуоресцеиновым изотиоцианатным антителом против CD324 или CD146, R-фикоэритриновым антителом против CD14, CD29, CD44 или CD73 и PerCP Cy5-5-конъюгированное антитело против CD105, чтобы подтвердить их мезенхимальное происхождение.

Анализы продукции цитокинов

Кондиционированную среду собирали из прилипших субконфлюентных культур MSC (5 и 21% кислорода) после удаления компонентов клетки центрифугированием.

Метод Luminex (Luminex, Остин, Техас, США) был использован для обнаружения следующих цитокинов: гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитарно-моноцитарный CSF (GM-CSF), макрофаги CSF, фактор стволовых клеток, интерлейкин 6 (IL-6), IL-12, хемоаттрактантный белок-1 моноцитов (MCP-1) и фактор некроза опухолей альфа (TNF-α).

Ферментно-связанный иммуносорбентный анализ использовали для выявления стромального фактора-1. Все анализы были выполнены в основном центре иммуноанализа FHCRC в соответствии с инструкциями производителя.

Клетки, активно растущие в логарифмической фазе, инкубировали с колцемидом 0, 1 мкг / мл в течение 60 мин при 37 ° С для остановки клеток в метафазе.

Затем клетки обрабатывали предварительно нагретым гипотоническим раствором (0, 075 М KCl) в течение 30 минут перед фиксацией в метаноле и ледяной уксусной кислоте (соотношение 2, 5: 1).

Фиксированные клетки помещали на предметные стекла, обрабатывали 0, 025% -ным трипсином в 0, 9% -ном NaCl и окрашивали разбавленным 1: 4 окрашиванием Райта (рН 6, 8) для полос Гимза-Трипсин-Райта. Метафазы анализировали под микроскопом при увеличении × 1250 для подсчета хромосом и структурной целостности.

По крайней мере 20 метафаз были проанализированы для каждого образца. Кариотипы были написаны в соответствии с действующей Международной системой цитогенетической номенклатуры человека (ISCN 2013).

17 Флуоресцентную гибридизацию in situ проводили на одном образце с использованием области центромеры зонда хромосомы 8p11.1-q111.1 (Abbott Molecular, Des Plaines, IL, USA). Слайды подсчитывали с использованием микроскопов AxioImager Z1 / 2 (Zeiss, Oberkochen, Germany) на 600 межфазных ядрах. Клональные результаты выше лабораторно установленных ложно-положительных предельных значений считались положительными.

Для всех пациентов и клеточных линий было использовано 100 нг высококачественной РНК. Суммарную РНК экстрагировали с использованием мини-набора RNeasy (Qiagen, Valencia, CA, USA), метили и гибридизовали с микрочипами Illumina HumanHT Expression BeadChip в соответствии с инструкциями производителя из FHCRC Genomics Core Facility.

Интенсивности сигнала были квантильно нормализованы с использованием «пакета люменов» от Bioconductor (//www.bioconductor.org/) и преобразованы log-2. Значительная дифференциальная экспрессия гена была определена как | log2 (отношение) |> 0, 585 (± 1, 5 раза) и частота ложных открытий 5%.

Наборы проб, сохраненные после применения фильтров интенсивности и дисперсии, использовались в анализе основных компонентов 18 для создания карты BML-MSC AML, бластов AML, нормальных BM-MSC, нормальных гемопоэтических MNC и стромальных клеточных линий (HS-5 и HS-27a) путем проекции данных на первые два главных компонента (то есть два направления, которые объясняют наибольшую дисперсию в размерном пространстве стандартизированных значений экспрессии генов). Эти наборы зондов также использовались для создания тепловой карты (дополнительный рисунок 1), которая удовлетворяла следующим условиям: log2 (ratio) |> 0, 585 и P- значение 0, 07). В условиях гипоксии по сравнению с нормоксическими условиями, однако, наблюдалось сильное снижение продукции цитокинов в AML BM-MSCs со значительно более низкими уровнями GM-CSF, фактора стволовых клеток и TNF-α ( P

Источник: https://ru.ovalengineering.com/mesenchymal-stromal-cells-derived-from-acute-myeloid-leukemia-bone-marrow-exhibit-aberrant-cytogenetics-198285

Поделиться:
Нет комментариев

    Добавить комментарий

    Ваш e-mail не будет опубликован. Все поля обязательны для заполнения.